آگرواینفیلتراسیون (Agroinfiltration)

گال های القا شده توسط باکتری آگروباکتریوم در گیاه
آگروباکتریوم (Agrobacterium)
اردیبهشت ۲۲, ۱۳۹۸
کپک لجن زرد درحال رشد در یک ظرف حاوی کاغذ مرطوب
زیست تخریب پذیری(Biodegradation )
اردیبهشت ۲۲, ۱۳۹۸
آگرواینفیلتراسیون از طریق تزریق مستقیم آگروباکتریوم به گیاه

آگرواینفیلتراسیون از طریق تزریق مستقیم آگروباکتریوم به گیاه

آگرواینفیلتراسیون(Agroinfiltration) یا نفوذ در گیاه یک روش در زیست­شناسی گیاهی و به تازگی در بیوتکنولوژی گیاهی است که در آن بیان ژن­ها در یک گیاه و یا برگ جدا شده از یک گیاه و یا حتی در کشت­ سلول­های گیاهی به منظور تولید پروتئین مورد نظر القا می­شود. در این روش محلولی از  آگروباکتریوم تومفاسینس (Agrobacterium tumefaciens) از طریق تزریق مستقیم و یا از طریق نفوذپذیری با خلاء و یا به وسیله در ارتباط قرار دادن این محلول با سلول­های گیاهی تثبیت شده بر روی یک داربست متخلخل به برگ یک گیاه وارد می شود. پس از آن، باکتری ژن مورد نظر را از طریق T-DNA به سلول های گیاهی منتقل می کند. مزیت اصلی آگرواینفیلتراسیون در مقایسه با انتقال به گیاه به روش سنتی، سرعت بالا و راحتی آن است.

اولین قدم، وارد کردن ژن مورد نظر به سویه­ی آگروباکتریوم تومفاسینس مورد نظر می­باشد. پس از آن، سویه در محیط کشت مایع رشد داده می­شود. سپس باکتری ها جمع آوری و شستشو شده و در درون یک محلول بافری مناسب ریخته می شوند. برای تزریق، این محلول درون یک سرنگ بدون سوزن قرار داده می­شود. سپس محلول آگروباکتریوم از طریق روزنه به درون فضاهای دارای هوا در داخل برگ می رود. گاهی اوقات تزریق از طریق یک برش کوچک ساخته شده در قسمت زیرین برگ انجام می­شود.

نفوذ به وسیله خلاء راه دیگری برای وارد کردن آگروباکتریوم به عمق بافت گیاه است. در این روش، دیسک­های برگی، برگ­ها و یا کل گیاه درون یک بشر حاوی محلول، غوطه­ور شده و بشر در یک محفظه خلاء قرار داده می شود. خلاء ایجاد شده باعث می شود هوا از طریق روزنه­ها از فضاهای بین سلولی موجود در برگ خارج شود. در نتیجه این اختلاف فشار، محلول “آگروباکتریوم” از طریق روزنه­ها وارد بافت مزوفیل برگ­ها می گردد. در نتیجه تقریبا تمامی سلول­های یک برگ در تماس با باکتری­ها قرار می­گیرند.

هنگامی که آگروباکتریوم در فضای بین سلولی برگ  باقی می­ماند، ژن مورد نظر را به عنوان بخشی از پلاسمید Ti مشتق از T-DNA با تعداد نسخه­ی بالا به سلول­های گیاهی منتقل می­کند. پس از آن ژن مورد نظر به صورت گذرا در تمام سلول­های آلوده شده بیان می­شود. به منظور بررسی اثر احتمالی روی فنوتیپ و یا بررسی شرایط آزمایش می­توان این گیاه را غرباگری نمود و یا برای تخلیص پروتئین مورد نظر برداشت کرد. بسیاری از گونه­های گیاهان می­توانند با استفاده از این روش مورد بررسی قرار گیرند، اما از متداول ترین آن­ها گیاه Nicotiana benthamiana و به میزان کمتر Nicotiana tabacum می­باشد.

بیان گذرا در بسته­های سلول­های گیاهی کشت داده شده، روش جدیدی است که در آن سلول­های کشت داده شده­ی معلق توتون و تنباکو از طریق فیلتراسیون بر روی یک داربست متخلخل قرار داده می­شوند تا یک بسته­ی سلولی با هوادهی مناسب را تشکیل دهند۱. سپس به همراه آگروباکتریوم نوترکیب برای مدت زمان مشخص انکوبه می­شوند تا امکان انتقال T-DNA فراهم گردد. سپس به منظور حذف باکتری و محلول اضافی مجددا فیلتر می­شوند. انکوباسیون بسته­ی سلولی در یک محیط مرطوب به مدت چند روز، بیان گذرای پروتئین مورد نظر را امکان­پذیر می­کند. پروتئین­های ترشح شده می­توانند با استفاده از بافر و فیلتراسیون از بسته­های سلولی شسته و خارج شوند.

آگرواینفیلتراسیون روشی است که در آن بیان ژن¬ها در یک گیاه و یا برگ جدا شده از یک گیاه و یا حتی در کشت¬ سلول¬های گیاهی به منظور تولید پروتئین مورد نظر القا می¬شود

آگرواینفیلتراسیون روشی است که در آن بیان ژن ها در یک گیاه و یا برگ جدا شده از یک گیاه و یا حتی در کشت سلول های گیاهی به منظور تولید پروتئین مورد نظر القا می شود

آگرواینفیلتراسیون از طریق تزریق مستقیم آگروباکتریوم به گیاه

آگرواینفیلتراسیون از طریق تزریق مستقیم آگروباکتریوم به گیاه

آگرواینفیلتراسیون از طریق نفوذپذیری با خلاء آگروباکتریوم به گیاه

آگرواینفیلتراسیون از طریق نفوذپذیری با خلاء آگروباکتریوم به گیاه

 

منبع:

http://www.google.com/patents/EP2623603A1?cl=en

Free WordPress Themes